技術(shù)類(lèi)型 | 傳統ES打靶技術(shù) | TetraOneTM打靶技術(shù) | TAELN | CRISPR/Cas9 |
技術(shù)方法 |
ES細胞的同源重組 囊胚注射 |
TetraOneTM ES細胞同源重組TetraOneTM注射技術(shù) |
核酸酶技術(shù) 原核注射 |
核酸酶技術(shù) 原核注射 |
DNA載體 | 利用同源臂進(jìn)行同源重組,并利用正負篩選基因,篩選陽(yáng)性克隆 | 利用同源臂進(jìn)行同源重組,并利用正負篩選基因,篩選陽(yáng)性克隆 |
TALE vector pair/FokI-dimer nuclease TALEN識別序列和FokI酶 |
gRNA vector/Cas9 nuclease gRNA識別序列和Cas9核酸酶 |
基因隨機插入與脫靶效應 | 無(wú) | 無(wú) | 會(huì )有一點(diǎn)概率的隨機插入和脫靶效應(取決于TALEN識別序列) | 會(huì )有一點(diǎn)概率的隨機插入和脫靶效應(取決于gRNA識別序列) |
結果再現性 | 非常好 | 非常好 | 一般 | 一般 |
制作周期 | 8-12月 | 6-8月 | 5-7月 | 5-7月 |
技術(shù)應用的研究范圍 | 完全性基因敲除,條件性基因敲除,基因定點(diǎn)插入,點(diǎn)突變研究,人源化研究 | 完全性基因敲除,條件性基因敲除,基因定點(diǎn)插入,點(diǎn)突變研究,人源化研究 | 完全性基因敲除,基因定點(diǎn)插入,點(diǎn)突變研究,人源化研究 | 完全性基因敲除,基因定點(diǎn)插入,點(diǎn)突變研究,人源化研究 |
物種限制 | 小鼠 | 小鼠 | 無(wú) | 無(wú) |
成果保證 | 有 | 有 | 基因敲除有保證,其他用途有不確定性 | 基因敲除有保證,其他用途有不確定性 |
技術(shù)流程要點(diǎn) | DNA打靶載體,ES陽(yáng)性克隆,細胞注射,嵌合體鼠獲得,F1鼠獲得,純合鼠獲得 | DNA打靶載體,ES陽(yáng)性克隆,細胞注射,去Neo雜合子鼠,純合鼠獲得 | 載體構建,F1雜合子鼠(大鼠與小鼠)獲得 | 載體構建,F1雜合子鼠(大鼠與小鼠)獲得 |
篩選繁殖 | 無(wú)需特殊工作,可以直接進(jìn)行后續試驗 | 無(wú)需特殊工作,可以直接進(jìn)行后續試驗 | 需要排除馬賽克現象對后續生殖遺傳的影響,并排除脫靶效應的影響 | 需要排除馬賽克現象對后續生殖遺傳的影響,并排除脫靶效應的影響(KI需要考慮隨機插入的影響) |