腫瘤動(dòng)物模型的建立可以：（1）評價(jià)抗腫瘤免疫治療的療效；（2）作為抗腫瘤藥物篩選模型；（3）為腫瘤轉移研究提供更好的研究平臺；（4）為研發(fā)抗腫瘤轉移性藥物提供良好的實(shí)驗工具。


實(shí)驗方法原理
      誘發(fā)性腫瘤動(dòng)物模型是指研究者用化學(xué)致癌劑、放射線(xiàn)、致癌病毒誘發(fā)動(dòng)物的腫瘤等。 


實(shí)驗材料
      腫瘤細胞   小鼠


試劑、試劑盒
      無(wú)血清培養基質(zhì)   3%中性甲醇   石臘


儀器、耗材
      低溫離心機   血球計數器   游標卡尺
  
實(shí)驗步驟


一、肝癌 
1．二乙基亞硝胺（DEN）誘發(fā)大白鼠肝癌


     （1）取體重250 g左右的封閉群大白鼠，雌雄不拘；
     （2）按性別分籠飼養。除給普通食物外，飼以致癌物，即用 0.25%DEN水溶液灌胃，劑量為10 mg/kg，每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由飲用；
     （3）共約4個(gè)月可誘發(fā)成肝癌；
     （4）也可以單用0.005%摻入飲水中口吸服8個(gè)月誘發(fā)肝癌。
2．4-2甲基氨基氮苯（DBA）誘發(fā)大鼠肝癌
     （1）用含0.06%DBA的飼料喂養大鼠，飼料中維生素B2 不應超過(guò)1.5～2 mg/kg；
     （2）4～6月就有大量的肝癌誘發(fā)成功。
3．2-乙酰氨基酸（2AAF）誘發(fā)小鼠、狗、貓、雞、兔肝癌
     （1）給成年大鼠含0.03% 2AAF標準飼料；
     （2）每日每平均2～3 mg 2AAF（也可將2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%動(dòng)物產(chǎn)生肝腫瘤。
4．二乙基亞硝胺誘發(fā)大鼠肝癌：
     （1）用劑量為每日0.3～14 mg/kg體重，混于飼料或飲水中給予；
     （2）6～9個(gè)月后255/300大鼠發(fā)生了肝癌。
5．亞胺基偶氮甲苯（OAAT）誘發(fā)小鼠肝癌
     （1）用1%OAAF苯溶液（約0.1 ml含1 mg）涂在動(dòng)物的兩肩胛間皮膚上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。
     （2）實(shí)驗后7～8周即而出現第一個(gè)肝腫瘤，7個(gè)月以上可誘發(fā)小鼠肝腫瘤約55%。
     （3）或用2.5 mg OAAT溶于葵瓜子油中，給C3H小鼠皮下注射4次，每日間隔10天，也可誘發(fā)成肝癌。
6．************誘發(fā)大鼠肝癌
     （1）每日飼料中含0.001～0.015 ppm，混入飼料中喂6個(gè)月后，肝癌誘發(fā)率達80％。


 二、胃癌
1．甲基膽蒽誘發(fā)小鼠胃癌
     （1）取20 g左右的小鼠，無(wú)菌手術(shù)下，在腺胃粘膜面穿掛含甲基膽蒽（MC）線(xiàn)結。
     （2）含MC的線(xiàn)結是用普通細線(xiàn)，在一端打結后，將線(xiàn)結置于盛有MC小玻璃試管內，在酒精燈上微微加溫，使MC液化滲入線(xiàn)結。MC濃度為0.05～0.1 g 20-甲基膽蒽內浸入10～20根線(xiàn)。
     （3）手術(shù)埋線(xiàn)后4～8個(gè)月可誘發(fā)成功胃癌。
2．不對稱(chēng)亞硝胺誘發(fā)小鼠胃癌


      劑量為0.25 ml/kg體重，3個(gè)月后全部動(dòng)物發(fā)生前胃乳頭狀癌，7～8個(gè)月后有85～100%發(fā)生前胃癌。昆明種最敏感。A系次之，615系小鼠敏感性最差。


3．甲基亞硝基醋酸尿素誘發(fā)小鼠胃癌


      給BD大鼠飲水中加甲基亞硝基醋酸尿素，劑量為2 mg/kg體重，每周飲用5次，520天后全部大鼠均發(fā)生了腺胃癌。


三、食管癌 
1．甲基芐基亞硝胺（MBNA）誘發(fā)大鼠食管癌


     （1）取體重100 g以上的Wistar大鼠；
     （2）任其食用含甲基芐基亞硝胺的飲水，并將MBNA摻入飼料中使每日攝入量達0.75～1.5 mg/kg體重；
     （3）80～100天可誘發(fā)成食管癌。
2．二烴黃樟素（Dihydrosafrole）誘發(fā)大鼠食管癌


     （1）二烴黃樟素是一種制備啤酒的調味品，在大鼠飼料中加入百萬(wàn)分之二千五百至一萬(wàn)（2500～10000 ppm）黃樟素，就能引起20～75%的食管癌。
3．甲基芐基亞硝胺誘發(fā)大鼠食管癌


    （1）用0.2%或0.005% 的甲基芐基亞硝胺水溶液，給動(dòng)物經(jīng)口灌喂，每天一次，大鼠灌注劑量為1 mg/kg體重；
    （2）至第27天即發(fā)現一例食管乳頭狀瘤，154天發(fā)現第一例食管癌， 11個(gè)月食管癌的發(fā)生率為53%。

 
四、肺癌 
1．二乙基亞硝胺（DEN）誘發(fā)小鼠肺癌


     （1）小白鼠每周皮下注射1%DEN水溶液一次，每次劑量56 mg/kg，DEN總劑量達到868 mg；
     （2）觀(guān)察時(shí)間為100天左右時(shí)，發(fā)癌率可達40%。
     （3）DEN總劑量達到1176 mg，觀(guān)察時(shí)間為半年左右時(shí)；發(fā)癌率可達94%。
2．烏拉坦誘發(fā)肺腺癌
     （1）小鼠（A系， 1～11/2月齡）較大鼠敏感，每次每只腹腔注入10%烏拉坦生理鹽水液0.1～0.3 ml，間隔3～5日再注，共注2～3個(gè)月，每只小鼠用量約為 100 mg；
     （2）注后3個(gè)月肺腺癌發(fā)生率為100%，而且多數為多發(fā)性，這種誘發(fā)瘤為良性。
3．苯并芘誘發(fā)肺腺癌
     （1）猴氣管內注入3，4-苯并芘（苯并花為3～15 mg與等量之Fe2O3混合液），每周一次，共10次；
     （2）6只猴中有2只誘發(fā)肺的鱗狀上皮癌。
 4．硫酸銨氣溶膠誘發(fā)肺腺癌
     （1）用硫酸胺氣溶劑給100只大鼠吸入；
     （2）13個(gè)月后所有大鼠都發(fā)生了肺腺癌。
5．甲基膽蒽誘發(fā)肺腺癌
     （1）用0.2%明膠作懸浮劑將甲基膽蒽混合后給金地鼠氣管內注入，每次0.1 ml（含甲基膽蒽 5 mg）每周一次，共6次；
     （2）53周后有62.5%動(dòng)物發(fā)生了肺癌。


 
五、鼻咽癌
1．二甲基膽蒽（MC）誘發(fā)大鼠鼻咽癌
     （1）取直徑2～3 mm的硬質(zhì)塑米管，在酒精燈上小火拉成錐形，每段長(cháng)約3.5 cm，管內填以結晶體MC。
     （2）小管一端用火封閉，以防藥物外溢，尖端用針刺數孔，使MC能從小妃溢出。
     （3）取體重120 g左右的大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，由前鼻孔將上述含MC的塑料小管插入鼻腔，利用前鼻孔較小管粗端為小的特點(diǎn)，稍加用力，迫使小管全部進(jìn)入鼻腔內，其尖部可達鼻咽腔。不需另加固定，即可使小管長(cháng)期留于鼻腔內。
     （4）待到預定時(shí)間（半年以上），或動(dòng)物自行死亡時(shí)，到其鼻咽部，10%福爾馬林固定，脫鈣后，石蠟包埋，進(jìn)行連續切片。發(fā)癌率可達60%以上。


2．二乙基亞硝胺滴鼻法誘發(fā)鼻咽癌
     （1）取120 g左右大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，用磨平針尖的8號針頭，從前鼻孔輕輕插入，針尖可達鼻咽腔；
     （2）經(jīng)注射器灌注用1%吐溫-80新配的 33.3%DEN混懸液0.0 2 ml(含DEN 6.7 mg)每周1次，共15～20次，可誘發(fā)成鼻咽癌。
 
 
六、宮頸癌 
1．二甲基膽蒽（MC）誘發(fā)宮頸


      取雌性小白鼠，以附有0.1 mgMC的棉紗線(xiàn)結在動(dòng)物不麻醉的狀態(tài)下，借助于陰道擴張器及磨純的彎針，將線(xiàn)穿入宮頸。經(jīng)右宮角背部穿出，使線(xiàn)結固定于宮頸口。線(xiàn)的另一端則固定于背部肌肉，縫合皮膚，掛線(xiàn)以后，同日開(kāi)始連續注射青霉素2～3天。以防術(shù)后感染。至一定時(shí)間（半年左右）處死動(dòng)物，宮頸組織用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，連續切片。


 
七、結腸癌 
1．二甲基芐肼（Dimethlhydrazine，DMH）誘發(fā)鼻咽癌


      （1）給四周齡的雄性大白鼠，皮下注射二甲基芐肼（Dimethlhydrazine，DMH）每周一次，連續21周，每次 DMH21 mg/kg；
      （2）最后一次給藥后1～4周，處死動(dòng)物；
      （3）降結腸部位用Bouin液固定，脫水，石蠟包埋，切片。所用之DMH先配成每100 ml含 400 mg的母液，并加EDTA37 mg，用氫氧化納（0.1 N）液將pH調至6.5備用。

注意事項


      1．要設計不同的實(shí)驗組和對照組， 每組動(dòng)物數一般為 5-10 只；
      2．一般接種腫瘤6-8 周后，小鼠的腫瘤可生長(cháng)至直徑為 15-20mm ( 即小鼠會(huì )瀕臨死亡) 時(shí)， 可眼球取血，分離血清并保存血清， 處死小鼠， 取腫瘤組織照相， 取部分腫瘤組織作 冰凍組織切片( 或- 80℃ 保存)， 作相應的免疫組織化學(xué)染色 ， 取部分腫瘤組織用3%中性的甲醛固定， 石臘包埋， 作常規HE 染色。


其他

1．芳香胺及偶氮染料類(lèi)致癌物的特點(diǎn)

     （1）通常需要長(cháng)期、大量給藥才能致癌；
     （2）腫瘤多發(fā)生于遠隔作用部位的器官如膀胱、肝等；
     （3）有明顯的種屬差異；
     （4）其本身不是直接致癌物，致癌是由于其某種代謝產(chǎn)物的作用；
     （5）其致癌作用往往受營(yíng)養或激素的影響，例如，奶黃僅在以缺少蛋白質(zhì)和核黃素的飼料喂飼大鼠時(shí)才引起肝癌，而且雄性大鼠較敏感，鄰位氨基偶氮甲苯則易起雌性大鼠的肝癌。
 
2．亞硝胺類(lèi)的致癌特點(diǎn)

     （1）致癌性強，小劑量一次給藥即可致癌；
     （2）對多種動(dòng)物（包括猴、豚鼠等不易誘發(fā)腫瘤的動(dòng)物）的許多器官（包括食管、腦、鼻竇等不易引起癌的器官）能致癌，甚至可以通過(guò)胎盤(pán)致癌，如給懷孕大鼠以二乙基亞硝胺（Diethy lnitrosamine,DEN）可比較快地引起仔鼠的神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤；
     （3）具有不同結構的亞硝胺有明顯的器官親和性，例如二甲基亞硝胺等對稱(chēng)的衍生物常引起肝癌，不對稱(chēng)的亞硝胺如甲基芐基亞硝胺常誘發(fā)食管癌；在大鼠，二丁基亞硝胺能引起膀胱癌，二戊基亞硝胺能誘發(fā)肺癌，而N-甲基-N-硝基-N-1-亞硝基胍則能引起胃腸癌。
 
3．黃曲霉毒素的致癌特點(diǎn)
     （1）黃曲霉毒素的毒性很強，很小劑量（1mg/kg體重）即可使狗、幼齡大鼠、火雞或小鴨致死；
     （2）其致癌性也極強，最小致癌劑量比亞硝胺還要小數十倍，是已知化學(xué)致癌物中作用最強者；
     （3）它能誘發(fā)多種動(dòng)物（從魚(yú)到猴）的肝癌，也可引起腎、胃及結腸的腺癌，滴入氣管內可引起肺鱗狀細胞癌；
     （4）注入皮下可引起局部的肉瘤，還有報告認為，它可引起淚腺、乳腺、卵巢等其它部位的腫瘤。
 
4．其他
      在動(dòng)物實(shí)驗中早已確定：乙硫氨酸可誘發(fā)大鼠肝癌；烏拉坦（氨基甲酸乙酯，C２H５O－CONH２）、氨乙胺可引起小鼠的肺癌；一些鹵代烴如四氯化碳、氯仿等可引起大鼠或小鼠的肝癌。