(一)非實(shí)體瘤細胞移植模型
臨床白血病患者的血液標本、骨髓標本或小鼠腹腔內培養傳代的非實(shí)體瘤腹水標本添加等量平衡鹽溶液(如PBS)或生理鹽水,充分混勻后進(jìn)行離心分離腫瘤細胞。如果是體外懸浮培養傳代的非實(shí)體瘤細胞,則直接收獲帶腫瘤細胞的培養液進(jìn)行離心獲得腫瘤細胞。離心的速度和時(shí)間是:800~1500r/min,5分鐘。從臨床白血病患者的血液標本和骨髓標本收獲的腫瘤細胞經(jīng)常含有紅細胞,還需要用紅細胞溶解劑(如0.83%NH4Cl)破碎紅細胞,然后用平衡鹽溶液洗滌離心細胞,棄除紅細胞溶解劑和碎片。以上各種來(lái)源的腫瘤細胞收獲后用無(wú)血清培養液或平衡鹽溶液調成(1×1000000~1×10000000)/ ml濃度,接種小鼠或裸小鼠或SCID小鼠腹腔或尾靜脈,每只小鼠0.2~0.5ml。接種的量根據細胞的惡性程度不同有所加減。臨床標本來(lái)源的及惡性程度偏低的腫瘤細胞一般接種量宜大不宜小。接種7~10天可以見(jiàn)小鼠腹部增大或檢測到血液中的腫瘤細胞。
另外,當小鼠腹腔接種成功后,可抽取小鼠腹水分離腫瘤細胞,進(jìn)一步作皮下接種制作實(shí)體瘤移植模型(參考后面實(shí)體瘤細胞移植模型的制作)。
(二)實(shí)體瘤細胞移植模型
臨床腫瘤組織或已在動(dòng)物體內移植傳代成功的腫瘤組織用平衡鹽溶液充分洗滌棄除血跡,并將周?chē)悄[瘤組織剪除干凈;然后將之剪碎(剪得越小越好);用平衡鹽溶液充分懸浮并移置離心管內,室溫下靜置5分鐘;棄除上層含細胞碎片的洗液,留下細小腫瘤組織沉淀;最后進(jìn)行浸泡消化:用腫瘤組織體積5~10倍的消化液重新懸浮腫瘤組織沉淀物并吹打均勻;放置在37℃中30分鐘,期間每隔5分鐘搖動(dòng)一次;用等體積含血清的培養液終止消化;室溫下靜置5分鐘;收集上層含細胞的懸液置另一離心管;下層未完全消化的腫瘤組織小塊可以進(jìn)行第二次的浸泡消化。多次收集到的腫瘤細胞懸液匯總后進(jìn)行離心,800~1000r/min,5分鐘;棄除上層液體,留下細胞沉淀;用完全培養液懸浮細胞、吹打均勻和進(jìn)行細胞計數,調細胞濃度為1×10000000/ml以上;最后進(jìn)行動(dòng)物皮下或原位接種,接種的細胞數為1000000~10000000個(gè)細胞,體積為皮下接種0.2~0.3ml,原位接種20~500μl。浸泡消化所用的消化液與不同組織的腫瘤有所不同:來(lái)源于一般器官的腫瘤組織用胰蛋白酶(PBS配制),來(lái)源于神經(jīng)組織或間質(zhì)組織的腫瘤組織用膠原酶(用無(wú)血清培養基配制)。一般接種后需要10天左右才能檢測到腫瘤細胞的生長(cháng)。