目的    建立微滴式數字 PCR 技術(shù)作為關(guān)鍵指標,實(shí)現精準檢測艾滋病動(dòng)物模型中細胞及組織中 SIV DNA 載量,用于儲存庫隱匿病毒實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)評估。

　　方法    根據成熟的 qPCR 方法,對 微滴式 dPCR 的反應條件進(jìn)行了優(yōu)化,確定最適退火溫度;通過(guò)對 10 倍系列稀釋 pGEM-SIVgag477 質(zhì)粒標準品的檢 測,確定 ddPCR 檢測范圍。 并通過(guò)對若干 DNA 樣品的多次檢測,判斷該檢測方法的穩定性。

　　結果    ddPCR 的退火 溫度為 60℃ ;檢測范圍是 0. 3~ 3. 96×104 copies/ μL;微滴式 dPCR 與 qPCR 有良好的相關(guān)性,相關(guān)系數 r = 0. 9981。

　　結論    本研究建立了基于微滴式 dPCR 的 SIV 病毒 DNA 的絕對定量方法,可有效的對細胞和組織中病毒儲存庫樣 本中病毒 DNA 載量進(jìn)行動(dòng)態(tài)絕對定量,極大提高了模型應用評價(jià)的準確度。