子宮內膜異位癥(EMT)是指具有生長(cháng)能力的子宮內膜組織出現在子官腔被覆黏膜以外的身體其他部位的一種疾病,臨床上以腹痛、痛經(jīng)、性交不適和不孕等為典型癥狀,屬于中醫"痛經(jīng)"、"倒經(jīng)"等范疇,氣滯血瘀和腎虛血瘀是主要證型。
【造模機制】在自體內膜移植法建立子宮內膜異位癥疾病模型的基礎上,采用藥物加情志刺激等多因素干預方法造成氣滯血瘀證候模型。
【造模方法】實(shí)驗動(dòng)物:Sprague Dawlev雌性成熟未孕大鼠。
1.EMT造模 4%水合氯醛(30ml/kg,腹腔注射)麻醉大鼠,選取尿道1:3上端約1cm處為切入點(diǎn),沿腹中線(xiàn)切開(kāi)2cm,逐層分離腹壁進(jìn)入盆腔,探查大鼠子宮(呈V形),細絲線(xiàn)結扎局部子宮血管后,取左側子宮角1~2cm,立即放入PBS溶液中,修剪去除子宮漿膜外的脂肪組織,縱向切開(kāi)子宮腔,切取5mm×5mm大小的子宮片,使其內膜面與右側腹膜相對,以5-0號絲線(xiàn)將其四角縫于腹壁。剩余部分子宮片進(jìn)行組織學(xué)觀(guān)察,以證實(shí)移植物確為子宮內膜組織。止血后向腹腔滴入以0.9%生理鹽水溶解的氨芐西林16萬(wàn)U/kg腹腔消毒,逐層縫合關(guān)腹。
2.氣滯血瘀證造模 于術(shù)前第5天和術(shù)后第10天開(kāi)始給予己烯雌酚灌胃0.02mg/kg,連續5天,使手術(shù)時(shí)大鼠統一處于動(dòng)情期;術(shù)后給予氨芐西林肌注l6萬(wàn)U/kg,連續5天。術(shù)后1周,待腹部切1:3基本愈合進(jìn)行以下證候干預:①用貼有紗布的止血鉗夾鼠尾,使之保持激怒爭斗狀態(tài),2分鐘/次,1次/周;②用繃帶細條束縛大鼠后肢,使之行走困難,30分鐘/次,每周1次;③食用油1ml/100g灌胃,1次/周;④1g/L腎上腺素皮下注射,0.2ml/只,1次/周。以上方法在1周內交替進(jìn)行。觀(guān)察指標:大鼠活動(dòng)狀況、精神狀態(tài)、毛皮、舌質(zhì)等,子宮內膜異位灶生長(cháng)情況以及病理、血清學(xué)指標等。
【模型特點(diǎn)】大鼠表現為精神萎靡、易激惹、喜蜷縮、貼邊、胡須下垂、被毛聳立且無(wú)光澤、耳緣紅紫、舌質(zhì)紫黯、尾部紅紫不清潔等癥狀。疾病模型和病證結合模型異位內膜的上皮細胞扁平,肌層較薄,結構不清。血清一氧化氮(NO)、內皮素(ET)單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)增高,5-羥色胺(5-HT)無(wú)明顯改變。
【模型評估和應用】①手術(shù)移植法建立EMT模型的主要方法,造型動(dòng)物可以用家兔、大鼠、猴等,方法相同。②以大鼠作模型動(dòng)物較經(jīng)濟,成活率高。③加用腎上腺素皮下注射,是模擬中醫病因及激怒時(shí)動(dòng)物的病理生理狀態(tài),多次應用后造成動(dòng)物在應激狀態(tài)下的神經(jīng)內分泌功能紊亂及免疫功能異常,不能抑制或消除異位內膜而促使其進(jìn)行生長(cháng)與繁殖,較符合該病的發(fā)病因素。④本模型不需要復雜和昂貴的設備,只要掌握手術(shù)方法,一般實(shí)驗室(無(wú)菌操作)即可復制。EMT大鼠模型的建立方法眾多,其中自體內膜移植法因造模方法仿照人類(lèi)EMT成因,具有模型穩定性高、成模率高的特點(diǎn),近年來(lái)被廣泛應用于實(shí)驗研究中。