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炎癥繼發(fā)性IBS動(dòng)物模型

  (1)復制方法  體重為0.7~1.0kg的雄性新西蘭兔,顆粒飼料喂養3d,以不排稀便者納入實(shí)驗。實(shí)驗前禁食不禁水18h后,經(jīng)鼻胃管給動(dòng)物灌入含1.5×1000000000E.Coli 015菌的 NaHCO3溶液10ml,以在灌菌后2~3d時(shí)開(kāi)始出現持續3~5d的排稀便、水樣便為感染成功標志,以排便恢復正常的時(shí)間為感染停止日。在動(dòng)物腸道感染成功后的次日,即施加寒冷束縛應激,于感染停止后1周、2周時(shí)分別記錄腸肌電?;蛟趧?dòng)物腸道感染停止后1~2周時(shí)施加寒冷束縛應激,應激結束后即時(shí)、1~2周時(shí)記錄腸肌電活動(dòng)。寒冷束縛應激實(shí)施方法:將兔四肢用膠布固定于鐵絲網(wǎng)架上,并置于60℃冷柜中(有小窗通空氣)。腸壁電極埋置和腸肌電活動(dòng)測定方法:將銀絲剪成30cm長(cháng),抽出高溫線(xiàn)內的金屬絲,置入銀絲,做成銀電極,電極長(cháng)3mm,75%乙醇浸泡消毒。用0.4%戊巴比妥(1ml/100g體重)對模型動(dòng)物進(jìn)行腹腔注射麻醉,碘酊和乙醇消毒皮膚,無(wú)菌手術(shù),逐層切開(kāi)腹壁,進(jìn)入腹腔。用穿刺針引導,分別于距盲腸3cm處的末端回腸、距盲腸25cm處的遠端大腸埋置銀電極。電極置于腸壁肌層內,與腸壁縱軸垂直。將電極經(jīng)腹壁皮下通過(guò)硅膠管引導至頸部引出,逐層縫合腹壁,絡(luò )合碘涂抹皮膚防止感染。術(shù)后分籠單獨飼養,照常進(jìn)食,1周后測定腸肌電活動(dòng)作為基礎期動(dòng)力指數。

  (2)模型特點(diǎn)  腸道感染成功次日施以寒冷束縛應激,1周、2周后,模型動(dòng)物末端回腸和遠端結腸的動(dòng)力指數顯著(zhù)增強;感染停止后1周和2周時(shí)施加寒冷束縛應激,模型動(dòng)物的動(dòng)力反應更加強烈。腸道組織學(xué)檢查顯示,模型動(dòng)物腸黏膜或肌層結構未見(jiàn)損傷,腸黏膜固有層內未發(fā)現中性粒細胞浸潤,僅見(jiàn)淋巴細胞、單核細胞、巨噬細胞、漿細胞等免疫細胞數增多。

  (3)比較醫學(xué)  臨床上,IBS患者癥狀有1/4繼發(fā)于感染所引起的胃腸運動(dòng)功能紊亂。流行病學(xué)調查顯示,IBS患者中有痢疾史者較多,而且這種IBS癥狀可以持續到病原微生物被完全清除之后。感染炎癥性IBS可能機制主要是由于胃腸黏膜炎癥促使腸神經(jīng)、平滑肌功能、腸運動(dòng)、腸感覺(jué)的改變,引起腸肌層及黏膜下層神經(jīng)節數目減少,導致腸動(dòng)力的改變,這種改變可以持續到黏膜炎癥完全清除之后。本方法采用人為給動(dòng)物感染大腸桿菌,誘發(fā)胃腸炎癥并使其對軀體及內臟痛覺(jué)過(guò)敏。在感染后立即施以應激刺激,則1~2周后末端回腸和遠端大腸的動(dòng)力指數明顯加強。在感染停止后1周或2周施以應激,則使動(dòng)物腸道對應激反應的強度更加劇烈。這表明應激和腸道感染兩因素共同作用時(shí)具有致腸動(dòng)力紊亂的協(xié)同效果,應激使感染后的腸道易于發(fā)生動(dòng)力紊亂,已被感染過(guò)的腸道對應激的反應更為強烈。與單純感染或應激刺激相比,本模型誘發(fā)的腸功能紊亂表現得更為持久和典型。本模型與人類(lèi)感染后的癥狀表現具有一定的相似性,是一種較為理想的感染后持續神經(jīng)肌肉功能紊亂的IBS動(dòng)物模型。除病原體感染外,化學(xué)物質(zhì)刺激產(chǎn)生的急性胃腸道炎癥,同樣能明顯增高其產(chǎn)生IBS癥狀的頻率,在炎癥緩解期后亦出現結腸運動(dòng)增大及內臟過(guò)敏,表現為對直腸球囊擴張敏感性的增強。如采用直腸內給予三硝基苯磺酸(TNBS)誘發(fā)大鼠急性結腸炎,恢復6周后連續3d給予輕度束縛應激,可以發(fā)現這些大鼠結腸對應激非常敏感。類(lèi)似化學(xué)物質(zhì)還包括醋酸、松節油、丙三醇(甘油)、芥子油、甲醛等。采用化學(xué)物質(zhì)刺激結腸雖亦可模擬人類(lèi)IBS胃腸功能紊亂的病理生理機制,且操作容易,但與人類(lèi)IBS發(fā)生過(guò)程具有較大的差異,炎癥消退后感覺(jué)異常狀態(tài)也會(huì )隨之消失,不符合IBS的腹痛或腹部不適的慢性持續過(guò)程,也不能體現腹痛之外的其他癥狀如大便性狀異常及排便習慣的改變。

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