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機械擴張性IBS動(dòng)物模型

  (1)復制方法  8日齡Wistar大鼠,采用動(dòng)脈成形術(shù)(PTCA)球囊(3.0mm×20mm)進(jìn)行結腸刺激(CI),1min/次,2次/d(間隔30min),連續1周;球囊壓力分別為4kPa(30mmHg)(弱刺激壓力),6kPa(45mmHg)(強刺激壓力),第2周均改為8kPa(60mmHg)。對照組大鼠每日被溫柔抓起,撫摸其會(huì )陰部1min。PTCA球囊每次擴張前均以75%乙醇及生理鹽水擦拭,同時(shí)觀(guān)察大鼠的大便和體重。乳鼠在完成上述刺激后休息2周,在第5、6、7、13周時(shí)進(jìn)行成年大鼠直結腸擴張(CRD)。結腸擴張球囊為醫用乳膠手套手指,長(cháng)4cm,用4號手術(shù)絲線(xiàn)與內鏡逆行胰膽管造影(ERCP)導管扎緊,壓力表、注射器及ERCP導管分別與三通管連接,注射器內抽入空氣。進(jìn)行結腸擴張前禁食12h,由肛門(mén)插入球囊6~8cm,待大鼠適應5min后分別注射空氣,使球囊內壓力分別達到2.7, 3.0, 5.3, 6.6, 8.0, 9.3, 10.6kPa,20, 30, 40, 50, 60, 70, 80mmHg,每個(gè)壓力持續20s,重復5次,每次給予壓力之間間歇3min,以雙盲法記錄給予每個(gè)壓力時(shí)大鼠結腸遭受刺激時(shí)的行為學(xué)評分,分別進(jìn)行5次,取其均值。實(shí)驗畢,處死動(dòng)物,距肛門(mén)10cm處摘取降結腸,作組織病理學(xué)檢查。行為學(xué)評分按CRD時(shí)大鼠腹肌收縮反應(AWR)進(jìn)行半定量評分:①大鼠在結腸擴張時(shí)無(wú)行為學(xué)反應:0分。②結腸擴張時(shí)身體靜止不動(dòng),頭部運動(dòng)減少:1分。③結腸擴張時(shí)腹部肌肉收縮,但腹肌未抬離桌面:2分。④結腸擴張時(shí)腹肌收縮并抬離桌面:3分。⑤結腸擴張時(shí)骨盆抬起,身體呈弓形:4分。結腸組織病理學(xué)檢查評分標準:①固有層少量中性粒細胞浸潤,輕度或無(wú)間質(zhì)水腫:+(輕度)。②固有層中等量粒細胞浸潤,間質(zhì)中度水腫:++(中度)。③固有層中量到大量中性粒細胞彌漫性浸潤,嚴重間質(zhì)水腫:+++(重度)。

  (2)模型特點(diǎn)  新生兒時(shí)期接受不同壓力結腸機械刺激的大鼠成年后直腸擴張時(shí),其腹肌收縮反應(AWR)評分顯示,模型大鼠傷害性刺激閾值顯著(zhù)下降,但4.0kPa(30mmHg)弱刺激壓力的下降幅度與6.0kPa(45mmHg)強刺激壓力比無(wú)顯著(zhù)性差異。直結腸擴張的耐受閾值測定結果亦提示,模型大鼠的初始感覺(jué)閾值、疼痛閾值、最大耐受閾值均下降,其中雌性大鼠對CRD的耐受性更差。此外,體重和病理切片檢查結果顯示,模型大鼠體重無(wú)顯著(zhù)異常,降結腸組織結構未見(jiàn)明顯損傷,但組織切片均有輕度的中性粒細胞浸潤。間質(zhì)無(wú)明顯水腫,屬于輕度。

  (3)比較醫學(xué)  反復的結直腸腔內擴張可造成外周及中樞敏感化,包括短暫的外周及中樞神經(jīng)元活性的功能性改變,也有持續的中樞神經(jīng)系統的可塑性改變,因此在刺激解除之后敏感化持續存在。本方法采用PTCA球囊對乳大鼠進(jìn)行持續或反復的結直腸擴張刺激,可導致其內臟敏感性增高,且這種獲得性的敏感可持續至成年,表現為直結腸擴張對CRD的初始感覺(jué)閾值、疼痛閾值、最大耐受閾值顯著(zhù)下降,這與人類(lèi) IBS癥狀相一致。雖然本模型的病因與人類(lèi)IBS不盡相同,但由于能較好地模擬IBS腹痛這個(gè)最突出的癥狀,且刺激可定量,微創(chuàng ),易于控制,重復性好,動(dòng)物可保持清醒,也有可靠的生理及行為反應,所以已成為研究?jì)扰K感覺(jué)功能的一種重要方法,是目前應用最多的口己s動(dòng)物模型之一。

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