我們都知道基因剪刀 CRISPR/CAS9 技術(shù)今年大火，之所以這個(gè)技術(shù)這么火和其對基因操作的方便性，高效性，準確性及高性?xún)r(jià)比是分不開(kāi)的。CRISPR/Cas9 是一種能夠對任何物種基因組的特定位點(diǎn)進(jìn)行精確編輯的技術(shù)。其原理是核酸內切酶 Cas9 蛋白通過(guò)導向性 RNA (guide RNA， gRNA) 識別特定基因組位點(diǎn)并對雙鏈 DNA 進(jìn)行切割。一旦 DNA 鏈被切開(kāi)后就能對特定基因引入敲除、敲入、突變等編輯。
圖注：基于非同源末端修復和同源重組原理可進(jìn)行基因敲除，敲入和突變等操作
然而基于傳統的 sgRNA 載體的 CRISPR-CAS9 技術(shù)，由于僅靶向一個(gè)位點(diǎn)，所以更適合單個(gè)編碼基因的敲除，對于多個(gè)編碼基因和非編碼基因則需要同時(shí)導入多個(gè) sgRNA 載體/病毒，使操作難度上升不小。
圖注：?jiǎn)?sgRNA 系統針對一個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行編輯
為解決多個(gè)編碼基因同時(shí)敲除和 lncRNA 敲除的需求，Multiplex sgRNA 技術(shù)應運而生
Multiplex sgRNA system 可同時(shí)插入不同的 sgRNA，幫助解決同時(shí)敲除多基因或非編碼基因編輯的需求?？梢酝瑫r(shí)插入 2~5 個(gè) sgRNA 符合不同的實(shí)驗需求。
針對多個(gè)編碼基因其敲除策略可以為：
圖注：同時(shí)設計兩個(gè)或多個(gè)編碼基因的特異性 sgRNA 序列，插入載體中可在一次操作后敲除多個(gè)編碼基因
而針對非編碼基因或區域其策略可以是：
圖注：針對想要敲除的非編碼基因或區域兩頭設計特異性 sgRNA 序列，靶向切除整段非編碼區域，以達到非編碼基因敲除的目的
對于通路研究的同學(xué)來(lái)說(shuō)，有時(shí)需要同時(shí)抑制多個(gè)通路，而通路抑制劑還是蠻貴的，如果有了可靠的通路關(guān)鍵基因的 sgRNA 序列，那就可以像通路抑制劑一樣使用 CRISPR/CAS9 技術(shù)來(lái)同時(shí)抑制多個(gè)信號通路了，大大提高了性?xún)r(jià)比。對于 Car-T 研究的同學(xué)來(lái)說(shuō)，編輯 T 細胞制作 UCAR-T 的時(shí)候需要同時(shí)敲除多個(gè)檢查點(diǎn)基因使得 CAR-T 細胞標準化和可量產(chǎn)化，這時(shí)同時(shí)導入多個(gè) sgRNA 就可以方便的滿(mǎn)足這一要求。
（本文轉載丁香通）
