一、非特異性染色的識別:
常出現在組織邊緣、膠原纖維及血漿滲出處,壞死組織及固定不良的組織中心處。表現為彌漫性,均勻性的背景染色。也可以是隨機分布的陽(yáng)性反應產(chǎn)物點(diǎn)、團或塊狀。
二、非特異性染色的原因及避免方法:
1. 靜電吸附
抗體是一種帶負電荷的球蛋白,容易和帶正電荷的組織相結合
2. 內源性過(guò)氧化物酶
紅細胞,粒細胞的含量尤其高,鏡下可以識別,不要將其當成陽(yáng)性結果。
3. 洗滌不徹底
保證各步驟的PBS或TBS沖洗的時(shí)間和量,方法要得當,最好可以把切片放在裝滿(mǎn)洗液的染色盒內浸泡一段時(shí)間以確保充分清洗。有一些人鑒于實(shí)驗經(jīng)費緊張,那吸管滴加標本上沖洗,這樣很難保證沖洗的干凈與否。這實(shí)際是千里之堤,潰于蟻穴。
4. DAB顯色反應時(shí)間過(guò)長(cháng)
最好是在顯微鏡下時(shí)時(shí)觀(guān)察一避免顯色回見(jiàn)過(guò)長(cháng)而引起的非特異性染色背景
5. 一抗稀釋液,可以在一抗稀釋液內適當添加1%BSA或合適濃度的二抗來(lái)源的血清。
以上是本人將親身實(shí)驗經(jīng)驗,加上網(wǎng)上資料以及舜百公司幫助而總結出的一些非特異性染色原因分析和控制的,希望能給各位提供一些幫助和指導!