免疫染色
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發(fā)布時(shí)間：2016-11-28
免疫染色
1．將膜置封閉液中，室溫搖晃30～60分鐘，封閉非特異性結合位點(diǎn)。
2．用封閉液稀釋特異性抗體，根據抗體的量預先確定稀釋度，通常1：100～1：10 000之間。將膜從封閉液中取出，置抗體稀釋液中，室溫搖晃反應30～60分鐘。用封閉液洗滌膜4次，每次10分鐘。
3．用封閉液稀釋結合堿性磷酸酶（或辣根過(guò)氧化物酶）的第二抗體，根據抗體的量預先確定稀釋度，通常在1：200～1：2 000之間。將膜置酶標記抗體稀釋液中，室溫搖晃反應30～60分鐘。用封閉液洗滌膜4次，每次10分鐘。
4．用50ml TBS洗滌膜，去除磷酸和Tween 20。在底物液中顯色10～30分鐘，注意觀(guān)察顯色情況。顯色完成后，用大量雙蒸水洗滌膜終止反應。觀(guān)察結果并照相。
