柱子長(cháng)了，相應的塔板數就高。柱子粗了，上樣后樣品的原點(diǎn)就?。ǚ从吃谥由暇褪?/span>樣品層比較?。?，這樣相對的減小了分離的難度。試想如果柱子十厘米，而樣品就有二厘米，那么分離的難度可想而知，恐怕要用很低極性的溶劑慢慢沖了。而如果樣品層有0.5厘米，那么各組分就比較容易得到完全分離了。當然采用粗大的柱子要犧牲比較多的硅膠和溶劑了，不過(guò)這些成本相對于產(chǎn)品來(lái)說(shuō)也許就不算什么了（有些不環(huán)保的說(shuō)，不過(guò)溶劑回收重蒸后也就減小了部分浪費）。現在見(jiàn)到的柱子徑高比一般在1：5～10，書(shū)中寫(xiě)硅膠量是樣品量的30～40倍，具體的選擇要具體分析。如果所需組分和雜質(zhì)分的比較開(kāi)（是指在所需組分rf在0.2～0.4，雜質(zhì)相差0.1以上），就可以少用硅膠，用小柱子（例如200毫克的樣品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我覺(jué)得可以增加柱子的直徑，比如用3cm的，也可以減小淋洗劑的極性等等。
真空液相層析即vacuum liquid chromatography(VLC),即用真空代替壓力進(jìn)行層析，具體方法可見(jiàn)Synthesis,2001,No,16,2431-,and J chem edu,1997,10,1222-干法上樣，一般用于固體或粘度大的液體樣品。樣品用低沸點(diǎn)易溶溶劑溶解，加入1-3倍的粗硅膠，晾干或旋干，干燥的標準是硅膠成細粉而不粘在瓶壁上。裝好的柱子上留一段溶劑，把吸附了樣品的硅膠慢慢到進(jìn)去，震動(dòng)柱子或再加一些溶劑，把粘在柱壁上的硅膠洗下
常說(shuō)的過(guò)柱子應該叫柱層析分離，也叫柱色譜。我們常用的是以硅膠或氧化鋁作固定相的吸附柱。由于柱分的經(jīng)驗成分太多，所以下面我就幾年來(lái)過(guò)柱的體會(huì )寫(xiě)些心得，希望能有所幫助。
柱子可以分為：加壓，常壓，減壓。
壓力可以增加淋洗劑的流動(dòng)速度，減少產(chǎn)品收集的時(shí)間，但是會(huì )減低柱子的塔板數。所以其他條件相同的時(shí)候，常壓柱是效率最高的，但是時(shí)間也最長(cháng)，比如天然化合物的分離，一個(gè)柱子幾個(gè)月也是有的。
減壓柱能夠減少硅膠的使用量，感覺(jué)能夠節省一半甚至更多，但是由于大量的空氣通過(guò)硅膠會(huì )使溶劑揮發(fā)（有時(shí)在柱子外面有水汽凝結），以及有些比較易分解的東西可能得不到，而且還必須同時(shí)使用水泵抽氣（很大的噪音，而且時(shí)間長(cháng)）。以前曾經(jīng)大量的過(guò)減壓柱，對它有比較深厚的感情，但是自從嘗試了加壓后，就幾乎再也沒(méi)動(dòng)過(guò)減壓的念
頭了。
加壓柱是一種比較好的方法，與常壓柱類(lèi)似，只不過(guò)外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵（給魚(yú)缸供氣的就行）。特別是在容易分解的樣品的分離中適用。壓力不可過(guò)大，不然溶劑走的太快就會(huì )減低分離效果。個(gè)人覺(jué)得加壓柱在普通的有機化合物的分離中是比較適用的。
關(guān)于無(wú)水無(wú)氧柱，適用于對氧，水敏感，易分解的產(chǎn)品。
可以濕柱，也可以干柱。不過(guò)在樣品之前至少要用溶劑把柱子飽和一次，因為溶劑和硅膠飽和時(shí)放出的熱量有可能是產(chǎn)品分解，畢竟要分離的是敏感的東東，小心不為過(guò)。也是因為分離的東西比較敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。至于是加壓、常壓、減壓，隨需而定。因為是schlenk操作，所以點(diǎn)板是個(gè)問(wèn)題，如果樣品是顯色的，恭喜了，不用點(diǎn)板，直接看柱子上的色帶就行了。如果樣品無(wú)色，只好準備幾十個(gè)schlenk瓶，一瓶一瓶的點(diǎn)，不過(guò)幾次之后就知道樣品在哪，也就可以省些了。像我以前過(guò)一根無(wú)水無(wú)氧柱，需要六個(gè)schlenk，現在只一個(gè)就能把所要的全收集到。
無(wú)水無(wú)氧柱中用的比較多的是用氧化鋁作固定相。因為硅膠中有大量的羥基裸露在外，很容易是樣品分解，特別是金屬有機化合物和含磷化合物。而氧化鋁可以做成堿性、中性和酸性的，選擇余地比較大，但是比硅膠要貴些。
聽(tīng)說(shuō)有個(gè)方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，這樣在柱子外面用紫外燈一照就知道產(chǎn)品在哪里了，沒(méi)有驗證過(guò)。哪位做過(guò)可以提出來(lái)大家參詳參詳。
關(guān)于濕法、干法上樣。
濕法省事，一般用淋洗劑溶解樣品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶劑越少越好，不然溶劑就成了淋洗劑了。很多樣品在上柱前是粘乎乎的，一般沒(méi)關(guān)系?？墒怯械纳蠘雍笤诠枘z上又會(huì )析出，這一般都是比較大量的樣品才會(huì )出現，是因為硅膠對樣品的吸附飽和，而樣品本身又是比較好的固體才會(huì )發(fā)生，這就應該先重結晶，得到大部分的產(chǎn)品后再柱分，如果不能重結晶那就不管它了，直接過(guò)就是了，樣品隨著(zhù)淋洗劑流動(dòng)會(huì )溶解的。有些樣品溶解性差，能溶解的溶劑又不能上柱（比如DMF,DMSO等，會(huì )隨著(zhù)溶劑一起走，顯色是一個(gè)很長(cháng)的脫尾），這時(shí)就必須用干法上柱了。樣品和硅膠的量有一種說(shuō)法是1：1，我覺(jué)得是越少越好，但是要保證在旋干后，不能看到明顯的固體顆粒（那說(shuō)明有的樣品沒(méi)有吸附在硅膠上）。
溶劑的選擇。
當然是最便宜，最安全，最環(huán)保的了。所以大多選用石油醚，乙酸乙酯。文獻中有寫(xiě)用正己烷的，太貴了，除非特別需要不要用不然銀子嘩嘩的，流的比淋洗劑還快，不過(guò)因為極性很小，有時(shí)還是非它不可。乙醚也可以用，但是就是容易睡覺(jué)，注意保持清醒別讓溶劑流干了，那樣柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅膠的吸附是一個(gè)放熱過(guò)程，所以夏天的時(shí)候經(jīng)常會(huì )在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時(shí)候會(huì )好一些。甲醇，據說(shuō)能溶解部分的硅膠，所以產(chǎn)品如果想過(guò)元素分析的話(huà)要留神，應該經(jīng)過(guò)后繼處理，比如說(shuō)重結晶等。其他的溶劑用的相對較少，要依個(gè)人的不同需要選擇了。由于某些原因，用到的淋洗劑多是大包裝的（便宜嘛），我們這里是用10升或25升的塑料桶裝的，就要注意這些工業(yè)品的純度是較低的。經(jīng)常能夠從送來(lái)的大桶底部看見(jiàn)有色的雜質(zhì)，其他的雜質(zhì)就可想而知了，所以在比較嚴格的柱分時(shí)就要對溶劑重蒸。當然過(guò)原料時(shí)就可以免去這一步了，反正下面還有提純的方法。另外溶劑在過(guò)柱子后最好也回收使用，一方面環(huán)保，另一方面也能節省部分經(jīng)費，缺點(diǎn)是要消耗一定的人工。這里要注意的是，一般在過(guò)柱同時(shí)進(jìn)行的是減壓旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會(huì )導致極性的變化，一般會(huì )使得極性變大，在梯度淋洗時(shí)比較合適，正好極性越來(lái)越大了。在過(guò)完柱子后，溶劑最后回收要采用常壓，因為在減壓旋蒸時(shí)會(huì )有部分低沸點(diǎn)的雜質(zhì)一起出來(lái)，常壓時(shí)就會(huì )減少這種現象，如果雜質(zhì)和你下面要過(guò)的樣品有反應那就慘了。
關(guān)于操作問(wèn)題。
1 裝柱。
柱子下面的活塞一定不要涂潤滑劑，會(huì )被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的，可以采用四氟節門(mén)的。干法和濕法裝柱覺(jué)得沒(méi)什么區別，只要能把柱子裝實(shí)就行。裝完的柱子應該要適度的緊密（太密了淋洗劑走的太慢），一定要均勻（不然樣品就會(huì )從一側斜著(zhù)下來(lái)）。書(shū)中寫(xiě)的都是不能見(jiàn)到氣泡，我覺(jué)得在大多數情況下有些小氣泡沒(méi)太大的影響，一加壓氣泡就全下來(lái)了。當然如果你裝的柱子總是有氣泡就說(shuō)明需要多練習了。但是柱子更忌諱的是開(kāi)裂，甭管豎的還是橫的，都會(huì )影響分離效果，甚至作廢！
2 加樣。
用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開(kāi)，待溶劑層下降至石英砂面時(shí)，再加少量的低極性溶劑，然后再打開(kāi)活塞，如此兩三次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗劑，一開(kāi)始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～4cm就夠了），再加壓，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。
3 淋洗劑的選擇。
感覺(jué)上要使所需點(diǎn)在rf0.2～0.3左右的比較好。不要認為在板上爬高了分的比較開(kāi)，過(guò)柱子就用那種極性，如果rf在0.6，即使相差0.2也不容易在柱子上分開(kāi)，因為柱子是一個(gè)多次爬板的狀態(tài)，可以通過(guò)公式的比較：0.6/0.8一次的分離度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。
4 樣品的收集。
用硅膠作固定相過(guò)柱子的原理是一個(gè)吸附與解吸的平衡。所以如果樣品與硅膠的吸附比較強的話(huà)，就不容易流出。這樣就會(huì )發(fā)生，后面的點(diǎn)先出，而前面的點(diǎn)后出。這時(shí)可以采用氧化鋁作固定相。另外，收集的試管大小要以樣品量而定，特別是小量樣品，如果用大試管，可能一根就收到了三個(gè)樣品，wuwu。如果都用小試管那工作量又太大。
5 最后的處理。
柱分后的產(chǎn)品，由于使用了大量的溶劑，其中的雜質(zhì)也會(huì )累積到產(chǎn)品中，所以如果想送分析，最好用少量的溶劑洗滌一下，因為大部分的雜質(zhì)是溶在溶劑里的，一洗基本就沒(méi)了，必要時(shí)進(jìn)行重結晶。
實(shí)驗室常用的正向柱分離有加壓、常壓和減壓等，我原是做天然產(chǎn)物全合成的，也做過(guò)少量天然產(chǎn)物分離工作。還常用到反向柱。
正向柱分離
1.TLC
1)加壓、常壓柱
主點(diǎn)Rf 0.5左右，相近的組份要能分開(kāi)。
2)減壓柱
主點(diǎn)Rf 0.1左右，相近的組份要能分開(kāi)，或次組份在原點(diǎn)。
2.硅膠或氧化鋁等
1)加壓、常壓柱
60到200目
2)減壓柱
300目以上
大空樹(shù)脂挺好，但自己用得少。硅藻土很多時(shí)侯也很好。
3.柱徑
好分、量大，柱徑可大些；難分、量小，柱徑可小些。
4.柱長(cháng)
與柱徑相似，好分、量大，柱長(cháng)可短些。
5.制樣
減壓一般是干法拌樣；加壓、常壓可干法拌樣，也可濕法備樣。
6.洗脫液
老板科研經(jīng)費多，用加壓、常壓耗溶劑太多；要想給老板省錢(qián)，給自己省時(shí)間，就用減壓。
7.接液
主點(diǎn)未出，多接；主點(diǎn)快出來(lái)及快出完，少接。
8.收率
對同一樣品且同量減壓一般收率低；加壓、常壓一般收率高。
9.備柱
無(wú)論減壓、加壓、常壓；無(wú)論干法、濕法備柱。填料要想法壓實(shí)，且備柱或過(guò)柱時(shí)均不可有氣泡、斷層、干柱（減壓除外。），否則一切從頭開(kāi)始。
（本文轉載丁香通）
