在制作石蠟組織切片標本的實(shí)踐中，筆者體會(huì )到要做出質(zhì)量好的組織切片標本，必須把握制作中的每個(gè)環(huán)節。為確保組織切片標本制作的順利進(jìn)行，現將操作要點(diǎn)介紹如下。

        1   取   材
        動(dòng)物處死后，應快速取出所需的組織。取材的刀要鋒利，嚴禁用手或鑷子擠壓，以免損傷組織。切取的組織塊厚度一般為0.5~1.0cm，大小1.5~2.0cm，以免影響固定效果。

        2   固   定
         固定是將組織塊用化學(xué)試劑浸泡，使組織內的蛋白質(zhì)等成分迅速凝固或沉淀，停止細胞瀕死前或死亡后的變化。同時(shí)組織固定后不易變形，有利于以后的組織處理。所以組織一旦離體必須及時(shí)固定，固定液的量大約為組織的5倍。常用10%的福爾馬林、zenker氏等固定液。固定時(shí)間約為24h。

        3   沖   洗

        固定好的組織塊需經(jīng)流水沖洗24h，沖洗不徹底容易造成脫片和染色不佳。對需做免疫組織化學(xué)的組織，更不能忽視這一步驟。

        4   脫水和透明

        5   浸   蠟

        6   包   埋

        7   切   片

        8   展片與撈片
        把切片放入溫水中展開(kāi)即為展片。展片水溫應在48℃~55℃，這主要和包埋蠟的熔點(diǎn)有關(guān)：水溫過(guò)高，會(huì )引起組織細胞散開(kāi)；水溫過(guò)低，切片皺摺無(wú)法攤平。展開(kāi)片子上的皺摺，有兩個(gè)方法：①在切片時(shí)邊切邊向蠟片吹氣，這樣片子放到熱水里會(huì )自然展平；②切片結束后，先把切片放在30%酒精水溶液中，讓酒精的張力自動(dòng)把皺摺展開(kāi)，然后再將切片移到熱水中，酒精濃度不宜過(guò)高，否則容易引起切片破碎，出現裂隙。脂肪類(lèi)組織遇到酒精會(huì )散開(kāi)，故不能用此法。撈片時(shí)，要選擇那些完整、無(wú)皺摺的切片，粘貼于載玻片上。
 

       9   烤片和脫蠟
        烤片是烤干切片上多余的水分和石蠟，并使切片與載玻片牢固粘貼。一般在60℃的溫箱內進(jìn)行，溫度過(guò)高，會(huì )引起切片的組織細胞收縮；時(shí)間太短（少于20min），容易造成脫片。脫蠟也相當重要，如果脫蠟不干凈，切片不易著(zhù)色或著(zhù)色不勻。所以在脫蠟過(guò)程中，脫蠟劑（松節油）要常更換（用15~20次）?？酒Y束后立即將切片放在溫箱內預熱（40℃~45℃）的松節油Ⅰ、Ⅱ中15min，然后經(jīng)下行梯度酒精洗去松節油至水。

        10   染   色
        按常規的HE染色。染色理想的切片在顯微鏡下應是細胞核與細胞質(zhì)藍紅相映，色澤鮮艷，核漿對比明顯，核膜及核染色質(zhì)顆粒清晰可見(jiàn)。

        11   脫水和封片
         切片脫水采用上行梯度酒精。濃度低的酒精比濃度高的酒精更容易脫水，但也容易使伊紅退色，故脫水時(shí)間要短（1~2min），也可無(wú)須用酒精脫水而直接晾干。切片經(jīng)二甲苯透明。用中性樹(shù)膠封片，一定要避免氣泡的產(chǎn)生。