實(shí)驗中二抗選擇要注意些什么
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發(fā)布時(shí)間：2016-12-10
實(shí)驗中在選擇二抗時(shí)必須注意以下幾點(diǎn)：
1、一抗種屬來(lái)源主要根據一抗種屬來(lái)源來(lái)決定確定二抗的類(lèi)型如一抗是小鼠來(lái)源那二抗就買(mǎi)抗小鼠的即可如羊抗小鼠、兔抗小鼠等均可。
2、一抗類(lèi)型 二抗需與一抗的類(lèi)別或亞類(lèi)相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類(lèi)免疫球蛋白因此相應的二抗就是抗IgG抗體。
單克隆抗體的類(lèi)別及亞類(lèi)通常會(huì )在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中都會(huì )有描述如果你的一抗是小鼠IgM那么相應的二抗就應當是抗小鼠IgM. 如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(lèi)IgG1IgG2aIgG2bIgG3那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結合或者你也可以選擇專(zhuān)門(mén)針對這一亞類(lèi)的二抗例如如果你的一抗是小鼠IgG1那么你可以選擇抗IgG1的二抗此種抗體在雙標記實(shí)驗中尤其適合。在不清楚一抗為何種類(lèi)/亞類(lèi)的情況下可以選用抗相應物種IgG。
3、標記物的選擇 一般來(lái)講耦聯(lián)到二抗上的探針主要有酶辣根過(guò)氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAPPAP熒光基團FITC RRX TR PE和生物素
選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗。對于western blot和ELISA最常用的二抗是酶標二抗而細胞或組織標記實(shí)驗細胞免疫化學(xué)組織免疫化學(xué)流式細胞術(shù)中通常使用熒光基團標記的二抗免疫組化中也可以使用辣根過(guò)氧化酶或堿性磷酸酶標記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測信號可以使用biotin/avidin檢測系統。已有的儀器可發(fā)光的波段進(jìn)行選擇。
