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分子提取方法(十)

DNA提取

(一)培養細胞DNA提取

2、試劑

PBS緩沖液、細胞裂解液、蛋白酶K溶液、tris飽和酚、氯仿、TE緩沖液、RNaseA 、3M醋酸鈉(PH 7.4)、乙醇等。

3、破碎細胞、釋放核酸(一)

(1)取對數生長(cháng)期細胞,1×106~109個(gè)細胞。

(2)棄上清液,PBS液沖洗2次。

(3)加入約250ul細胞裂解液,緩慢混勻。

(4)37℃孵育20min。

(5)加入適量蛋白酶K(終濃度達到100ug/ml),混勻。

(6)55℃,水浴1H。

(7)加入150ulTris飽和酚(PH8.0),混勻。

(8)加入等體積(150ul)氯仿,輕柔混勻1min。

(9)12000rpm,室溫,離心10min。

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