流式細胞術(shù)：即FCM。很多小伙伴在過(guò)程中會(huì )碰到很多問(wèn)題，比如：無(wú)信號、熒光強度高等一系列問(wèn)題，今天中洪小編就帶大家玩轉流式細胞技術(shù)！

目前，流式細胞術(shù)廣泛應用于細胞表面和細胞內分子表達特征的分析，界定不同種類(lèi)的細胞群，測定分離出的亞類(lèi)純度，分析細胞的大小和總量，它可以同時(shí)分析單個(gè)細胞的多個(gè)參數。它主要用于檢測標記在抗體上的熒光強度，這些熒光抗體則可以檢測與特定細胞分子結合的蛋白或配體，如與 DNA 結合的溴化丙啶 (PI) 等。

實(shí)驗原理

待測樣品(如細胞、染色體、精子或細菌等)經(jīng)熒光染料染色后制成樣品懸液，在一定壓力下通過(guò)殼液包圍的進(jìn)樣管而進(jìn)入流動(dòng)室，排成單列的細胞，由流動(dòng)室的噴嘴噴出而成為細胞液流，并與入射激光束相交。細胞被激發(fā)而產(chǎn)生熒光，由放在與入射的激光束和細胞液流成 90°處的光學(xué)系統收集之。光學(xué)系統中的阻斷濾片用于阻擋激發(fā)光；二色分光鏡及另一些阻斷濾片則用于選擇熒光波長(cháng)。熒光檢測器為光電倍增管。散射光檢測器是光電二極管，用以收集前向散射光。小角度前向散射與細胞大小有關(guān)。

臨床應用

1、細胞生物學(xué)研究

流式細胞術(shù)可用于測定細胞周期各時(shí)相細胞的百分比。通過(guò)測定細胞群體中每個(gè)細胞的DNA含量，得出DNA含量分布曲線(xiàn)。同時(shí)可進(jìn)行多參數分析，即同時(shí)測定一個(gè)細胞的多種性質(zhì)。如散射光和熒光，或多種不同顏色的熒光。此外,流式細胞術(shù)還可測定細胞群體同步化的程度和所處的時(shí)期，鑒別死細胞和活細胞，利用熒光標記配體，還可定量測定細胞表面和內部的受體等。是研究DNA合成和細胞周期的一種非常有用的技術(shù)。

2、細胞免疫學(xué)

結合免疫熒光方法，流式細胞術(shù)可辨認和計數帶有不同表面特異性抗原的細胞，此外，流式細胞術(shù)還可用于定量分析結合于細胞上的熒光素標記的外源凝集素，測定細胞表面積和熒光素結合位點(diǎn)的相對密度，結合細胞動(dòng)力學(xué)測定每個(gè)細胞結合位點(diǎn)的數目，以及研究各種外源凝集素與細胞表面結合的競爭性等。

3、腫瘤學(xué)

應用主要是通過(guò)測DNA含量實(shí)現的，包括癌前病變檢查、早期癌變的檢出、化療指導以及預后評估等。

正常細胞均是DNA二倍體，當細胞癌基因表達或者由良性的腫瘤細胞轉變成惡性腫瘤細胞時(shí)，這些細胞中DNA水平會(huì )發(fā)生改變，這些細胞的DNA倍體變化或者染色體結構異常在FCM檢測過(guò)程中會(huì )以DNA倍體數量的改變表現出來(lái)。FCM對DNA異倍體精確的分析是腫瘤診斷、間葉組織良惡性腫瘤判斷的重要依據。利用FCM還可以測定腫瘤細胞的增殖活性、分化程度和凋亡水平，這些細胞參數與腫瘤的惡性程度密切相關(guān)，并為腫瘤臨床治療方案的選擇提供可靠的理論基礎。

4、遺傳學(xué)

用流式細胞術(shù)測定染色體DNA含量,可得到染色體頻率分布圖，稱(chēng)為流式染色體核型分析。同類(lèi)型染色體出現一個(gè)峰，峰的面積代表這種類(lèi)型染色體的豐度。流式染色體核型分析技術(shù)不僅能快速分析核型，而且能分選出不同類(lèi)型的染色體,做成人類(lèi)每條染色體的DNA文庫，可用于人類(lèi)基因組研究、遺傳病和癌癥的診斷的研究。

常見(jiàn)問(wèn)題及解答